Methyl Red and Voges-Proskauer Test

Methyl Red and Voges-Proskauer Test
Mục đích:
Methyl Red and Voges-Proskauer Test là 1 cặp của test sinh hóa IMViC(indole,
methyl red, Voges-Proskauer and citrate)
Thường dùng để phân biệt các thành viên trong gia đình Enterobacteriaceae
Lí thuyết:
Methyl red
Escherichia coli và những chủng có tỉ lệ thấp khác
được mô tả bởi Clack và Lubs lên men đường taọ ra 1 hỗn hợp acid và 1 tỉ lệ thấp
CO_2,H₂ (4mol acid chủ yếu lactic và acetic acid),1mol
Ethanol,1mol CO2,1mol H2.số lượng lớn acid là nguyên
nhân của sự giảm pH trong môi trường.
Enterobacter aerogenes và nhửng chũng có tỉ lệ cao lên men theo con đường butanediol cho nhiều khí nhưng chỉ 1mol acid.kết quả con đường này trong 1 cấp độ sự axit hóa môi trường thấp hơn.
Methyl red:pH 4.4 (đỏ) sang 6.0(vàng).
khi mt thay đổi thành đỏ sau khi thêm methyl red,do pH=<4.4 từ sự lên men đường,MR(+).
MR(-) thể hiện bởi màu vàng trong môi trường xuất hiện khi 1 lượng acid cực thấp được sản xuất(pH cao hơn)
Voges –proskauer
Vi khuân lên men đường theo con đường butanediol sản xuất acetoin(acetyl methyl carbinol or 3-hydroxybutanone)như 1 trung gian mà xa hơn bị khử thành 2,3-butanediol
2 pyruvate = acetoin + 2 CO₂
acetoin + NADH + H⁺ = 2,3-butanediol + NAD⁺
trong sự hiện diện của KOH thì acetoin bị oxi hóa thành diacetyl với sự xúc tác của alpha-naphthol.diacetyl tác dụng với nhóm guanidine kết hợp với những phân tử cộng thêm bởi peptone trong môi trường tạo ra 1 dạng sản phẩm màu đỏ hơi hồng. alpha-naphthol như là 1 chất làm gia tăng màu.
Kết quả:
Methyl red:
kết quả âm tính giả hoặc 1 màu cam không xác định có thể hiện diện do độ dài đường cấy ko đủ.làm test lại trong 24 -48h.
dương tính giả nếu tăng nồng độ glucose trong mt
Voges Prokauer: ủ trong thơì gian quá ngắn hoặc dài hơn 48h,sẽ cho (-)giả do sự tích lũy acetoin quá thấp ko đủ để thể hiện,hoặc quá lâu và bị khử thành 2,3 butanediol
chú ý 1 số vi khuẩn(Hafia alveii và Enterobacter) VP thay đổi khi sinh trưởng ở 37^oC nhưng VP (+) ở 25-30^oC